← Назад
Диагностика и обследования

Проточная цитометрия (иммунофенотипирование)

Микроскоп показывает, как выглядит клетка, но не всегда может отличить две похожие клетки. Проточная цитометрия «читает» особые белки на поверхности и внутри клетки и точно определяет, кто она такая. В этой теме — как работает этот тест, как он определяет вид лейкоза и что значат записи вроде «CD19+» и «CD34+» в заключении.

Последнее обновление: Время чтения ~5 мин
Полупрозрачные клетки, текущие друг за другом по тонкому светящемуся каналу на тёмно-синем фоне; тонкий синий и зелёный луч света пересекает канал и подсвечивает одну из клеток.
Рисунок 1.Концепция: клетки по одной проходят тонкой струёй через лазерный луч.

01Короткий ответ

Проточная цитометрия — лабораторный метод, при котором клетки из крови, костного мозга или другой жидкости метят антителами с флуоресцентными красителями и по одной пропускают в потоке жидкости через световой (лазерный) луч. Прибор регистрирует размер каждой клетки, её внутреннюю структуру и то, какие маркеры (антигены) она несёт. Большинство маркеров обозначают номером CD. По этим данным определяют, к какой линии относится лейкоз — миелоидной, B-лимфоидной или T-лимфоидной, насколько он зрелый и чем отличается от нормальных клеток; это и называется иммунофенотипированием. Проточная цитометрия — ключевой тест, чтобы отличить ОМЛ от ОЛЛ, определить B- или T-вариант ОЛЛ, подтвердить ХЛЛ и волосатоклеточный лейкоз. Во время лечения её используют для поиска остаточных лейкозных клеток, невидимых в обычный микроскоп (МОБ). Некоторые маркеры также служат мишенями иммунотерапии. Обсуждайте результаты с гематологом.

02Простое объяснение

На поверхности каждой клетки есть маленькие белковые «флажки». Разные виды клеток носят разные наборы флажков — своего рода «форму». Проточная цитометрия находит и считает эти флажки и так узнаёт, кто перед ней.

В лаборатории к образцу добавляют особые антитела. Каждое антитело прилипает только к одному флажку и светится своим цветом. Затем клетки по одной проходят тонкой струёй мимо лазерного луча, а прибор записывает, какие цвета загорелись.

Запись «CD19+» в заключении означает, что этот маркер на клетке есть, а «CD19−» — что его нет. Иногда пишут «слабая» (dim) или «яркая» (bright) экспрессия — это показывает, сколько маркера на клетке.

Проточная цитометрия очень быстрая: она измеряет тысячи клеток в секунду и часто становится одним из первых специальных результатов. Она помогает врачу быстро понять вид лейкоза и вовремя спланировать лечение.

После лечения тот же метод можно использовать для поиска очень небольшого числа оставшихся лейкозных клеток. Это называется МОБ, и она показывает, насколько глубоко подействовало лечение.

03Научное объяснение

Основа метода: по данным NCI, при проточной цитометрии клетки образца окрашивают флуоресцентным красителем, помещают в жидкость и по одной пропускают через луч света; тест измеряет число клеток, долю живых клеток, их размер, форму и наличие опухолевых (или других) маркеров на поверхности. Современные приборы одновременно измеряют 8 и более цветов. Европейский консорциум EuroFlow разработал стандартизированные панели антител, чтобы результаты разных лабораторий можно было сравнивать. ACS отмечает, что тот же принцип антител применяют и к ткани биопсии под микроскопом — это иммуногистохимия.

Маркеры линий: незрелые бласты часто несут CD34. Для B-линии характерны сильный CD19 вместе с CD79a, цитоплазматическим CD22 или CD10; для T-линии — сильный цитоплазматический или поверхностный CD3; для миелоидной линии — миелопероксидаза (МПО) и такие маркеры, как CD13, CD33, CD117 (NCI). Если в одном лейкозе сильно выражены маркеры нескольких линий, это может быть острый лейкоз со смешанным фенотипом (MPAL) — редкая ситуация, требующая особого подхода.

При хронических лейкозах: по данным NCI, при ХЛЛ в крови обычно 5 000/мм³ лимфоцитов и больше с характерным иммунофенотипом — B-клетки, положительные по CD5 и CD23, с небольшим количеством поверхностного иммуноглобулина и только одной лёгкой цепью (каппа или лямбда). Эта «одна лёгкая цепь» показывает, что клетки произошли из одного клона — одной клетки. Если B-клеток меньше 5 ×10⁹/л и других признаков нет, состояние называют моноклональным B-клеточным лимфоцитозом (MBL). При волосатоклеточном лейкозе типичны CD11c, CD25, CD103 и CD123, и диагноз часто можно поставить по проточной цитометрии крови.

МОБ и мишени лечения: согласно консенсусу ELN 2021 года, МОБ при ОМЛ методом проточной цитометрии измеряют, отыскивая «лейкоз-ассоциированный иммунофенотип», отличающийся от нормальных клеток, и уровень 0,1% и выше считают МОБ-положительным. При ОЛЛ проточная цитометрия рутинно выявляет 1 лейкозную клетку на 10 000. Некоторые маркеры — мишени препаратов (CD19, CD22, CD33, CD20), поэтому результаты проточной цитометрии могут влиять и на выбор лечения.

04Что происходит в организме?

Откуда берут образец?

Чаще всего используют аспират костного мозга или кровь; иногда исследуют спинномозговую жидкость или другую ткань. При ХЛЛ и волосатоклеточном лейкозе диагноз часто можно поставить только по образцу крови. Методу нужны живые клетки, поэтому образец должен быстро попасть в лабораторию.

Лазер и цветные огни

Когда меченные антителами клетки проходят тонкой струёй через лазерный луч, каждая даёт свою «цветовую подпись». Прибор собирает эти сигналы, а компьютер группирует похожие клетки. Специалист анализирует эти группы, чтобы найти клетки, отличающиеся от ожидаемых в нормальном образце.

Крупная полупрозрачная круглая клетка на тёмно-синем фоне; на её поверхности мягко светятся маленькие Y-образные антитела разных цветов — синие, зелёные, оранжевые.
Рисунок 2.Цветные антитела прикрепляются к маркерам на поверхности клетки.

Разделить «семьи» клеток

В итоге клетки выглядят на экране как отдельные «облака»: нормальные лимфоциты, моноциты, нейтрофилы и необычная группа бластов. Лейкозные клетки часто выделяются среди здоровых по сочетанию своих маркеров. Это становится основой и для диагноза, и для последующего контроля МОБ.

Маленькие светящиеся точки на тёмно-синем фоне, собранные в несколько отдельных «облаков»; одно из них светится иначе — фиолетовым, без осей и надписей.
Рисунок 3.Прибор группирует похожие клетки и показывает необычную группу.

Когда будет результат?

Проточная цитометрия часто даёт результат быстрее других специальных тестов — иногда в течение одного-двух дней. Это особенно важно при остром лейкозе, когда план лечения нужно составить быстро. Генетические тесты обычно требуют больше времени.

05Как работает проточная цитометрия?

Четыре шага — от образца до «паспорта» лейкоза.

Образец — Аспират костного мозга, кровь или другая жидкость.1ОбразецАспират костного мозга, кровь или другая жидкость.
Антитела — Цветные антитела прилипают к маркерам.2АнтителаЦветные антитела прилипают к маркерам.
Лазер — Клетки по одной проходят через луч света.3ЛазерКлетки по одной проходят через луч света.
Анализ — Определяют группы клеток и иммунофенотип.4АнализОпределяют группы клеток и иммунофенотип.
ЛинияМиелоидная, B или T.
МишениМаркеры вроде CD19, CD20, CD22, CD33.
МОБИзмерение невидимых остаточных клеток.

06Типичные иммунофенотипы (упрощённо)

ЛейкозЧасто встречающиеся маркерыПримечание
ОМЛCD34, CD117, CD13, CD33, МПОМиелоидная линия; зависит от подвида
B-ОЛЛCD19, CD79a, CD22, CD10, TdT, CD34Предшественники B-клеток
T-ОЛЛЦитоплазматический CD3, CD7, CD2, CD5, TdTПредшественники T-клеток
ХЛЛCD19, CD5, CD23; слабые CD20 и поверхностный иммуноглобулинОдна лёгкая цепь (каппа или лямбда) — признак клона
Волосатоклеточный лейкозCD11c, CD25, CD103, CD123Диагноз часто возможен по крови
MPALМаркеры нескольких линийРедко; особый подход к лечению

* Таблица показывает общую картину; при каждом лейкозе сочетание маркеров может отличаться, а диагноз ставят по совокупности всех тестов. Обсудите результаты с гематологом.

07Ключевые термины

Проточная цитометрия
Метод, который измеряет клетки, пропуская их в потоке жидкости через лазерный луч.
Иммунофенотипирование
Распознавание клеток по их маркерам с помощью антител.
CD-маркер
Белок на поверхности клетки, обозначенный номером («кластер дифференцировки»).
Антитело
Белковая молекула, которая точно прикрепляется к определённому белку.
Флуоресцентный краситель
Вещество, светящееся своим цветом под лучом света.
Линия
Семья, к которой относится клетка: миелоидная, B или T.
Клон
Группа одинаковых клеток, произошедших из одной клетки.
Лёгкая цепь
Часть иммуноглобулина — каппа или лямбда; указывает на клональность.
MPAL
Острый лейкоз со смешанным фенотипом — маркеры нескольких линий.
Иммуногистохимия
Применение антител к срезу ткани под микроскопом.

08Главное

  • Проточная цитометрия измеряет маркеры клеток.
  • Она показывает, относится ли лейкоз к миелоидной, B- или T-линии.
  • Это ключевой тест, чтобы отличить ОМЛ от ОЛЛ.
  • При ХЛЛ и волосатоклеточном лейкозе диагноз часто ставят по крови.
  • «+» — маркер есть, «−» — маркера нет.
  • Результаты часто готовы быстро.
  • После лечения метод используют для контроля МОБ.
  • Некоторые маркеры — мишени иммунотерапии.

09Частые вопросы

Нужна ли для проточной цитометрии отдельная процедура?

Обычно нет. Тест проводят на образце, взятом для анализа крови или аспирации костного мозга. Просто лаборатория работает с живыми клетками, поэтому образец нужно доставить быстро.

В заключении много CD-номеров. Нужно ли мне знать их все?

Нет. Этот список — для специалистов. Для вас главное — итоговый вывод: какой вид лейкоза найден и что это значит для лечения. Попросите гематолога объяснить это простыми словами.

Заменяет ли проточная цитометрия генетический тест?

Нет. Проточная цитометрия показывает белки клетки, а генетические тесты — изменения в ДНК. Они дополняют друг друга: одна уточняет вид, другие — группу риска и таргетные препараты.

Влияет ли «CD20+» на лечение?

Может. При некоторых лейкозах и лимфомах CD20 — мишень антител к CD20. Но выбор лечения зависит от многих факторов — решение может принять только ваш гематолог.

Когда делают проточную цитометрию на МОБ?

Обычно на определённых этапах лечения — например, в конце индукции — на образце костного мозга. График зависит от вида лейкоза и протокола.

Могут ли маркеры лейкозных клеток меняться?

Да, иногда — особенно при рецидиве или после некоторых видов иммунотерапии. Поэтому при повторных тестах лаборатория учитывает и исходный иммунофенотип.

10Вопросы врачу

Возьмите эти вопросы на приём. Сохранённые собираются на странице «Мои вопросы» и остаются только на этом устройстве.

  1. Какой тип лейкоза показала проточная цитометрия?

  2. Какие иммунофенотипические маркеры нашли?

  3. Будет ли этот результат использоваться для контроля МОБ?

  4. Когда мы повторим проточную цитометрию?

Мои вопросы

12Источники

  1. National Cancer Institute (NCI). NCI Dictionary of Cancer Terms: flow cytometry
  2. National Cancer Institute (NCI). NCI Dictionary of Cancer Terms: immunophenotyping
  3. National Cancer Institute (NCI). Adult Acute Myeloid Leukemia Treatment (PDQ®) — Patient Version
  4. National Cancer Institute (NCI). Chronic Lymphocytic Leukemia Treatment (PDQ®) — Health Professional Version
  5. National Cancer Institute (NCI). Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia Treatment (PDQ®) — Health Professional Version
  6. National Cancer Institute (NCI). Hairy Cell Leukemia Treatment (PDQ®) — Health Professional Version
  7. American Cancer Society. Tests for Acute Myeloid Leukemia (AML)
  8. American Cancer Society. Acute Lymphocytic Leukemia Subtypes and Prognostic Factors
  9. American Cancer Society. Tests for CLL
  10. Testing.com. Immunophenotyping by Flow Cytometry Explained
  11. Blood (American Society of Hematology), 2021. 2021 Update on MRD in acute myeloid leukemia: a consensus document from the European LeukemiaNet MRD Working Party
  12. Leukemia, 2012. EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes
  13. Leukemia, 2022. The 5th edition of the World Health Organization Classification of Haematolymphoid Tumours: Lymphoid Neoplasms
  14. Blood (American Society of Hematology), 2018. iwCLL guidelines for diagnosis, indications for treatment, response assessment, and supportive management of CLL
Медицинское предупреждениеЭта информация предназначена только для ознакомления и не заменяет консультацию врача.
Последнее обновление: ← Вернуться к списку

Открыть интерактивную версию сайта →